摘要：本发明公开了一种条件性诱导Cas9表达的猪滋养层细胞系及其建立方法和应用，其是将Tet-on系统控制Cas9基因表达的慢病毒载体进行病毒包装，浓缩、纯化；慢病毒与特征的猪滋养层细胞系孵育后换液，添加嘌呤霉素进行药物筛选，将细胞稀释至单个细胞进行培养，得到单个细胞来源的Tet-on调控Cas9表达的猪滋养层细胞系。本发明的猪滋养层细胞系操作简单，使用方便，对于研究一些滋养层细胞的关键功能基因和猪基因靶点的筛选具有潜在的使用价值，这个细胞系将成为研究猪胎盘发育的一个重要的细胞材料，可应用于猪早期胎盘发育和子宫妊娠机制的相关研究，同时对于人类早期胚胎发育的研究也具有很大的参考价值。

摘要：本发明公开了一种用于猪基因编辑的高效特异性sgRNA识别位点引导序列及其筛选方法，所述筛选方法包括步骤：功能基因筛选及ORF分析、功能基因sgRNA识别位点引导序列预测、全基因组脱靶位点检测、依据脱靶信息与靶位点位置对预测的靶位点打分，排序、结果筛选与统计、算法优化与软件开发。本发明的猪的特异性sgRNA识别位点引导序列经过了严格的筛选与检验，包含所有猪蛋白编码基因的用于CRISPR‑Cas9基因编辑的sgRNA识别位点引导序列；本发明中对特异性sgRNA识别的鉴定、打分和检验算法，以及算法对应的用于预测和评估猪的功能基因sgRNA识别位点引导序列的软件可广泛用于具有全基因组序列的非模式物种的sgRNA特异位点预测。

摘要：本发明公开了一种稳定表达Cas9蛋白的猪肠道上皮细胞系，是以新生仔猪非转化肠道上皮细胞系IPEC‑J2为宿主细胞，转染含Cas9的慢病毒表达载体，经过20μg/mL的Blasticidin筛选得到的能够稳定表达Cas9蛋白的转化体。其构建方法为：(1)含Cas9的慢病毒表达载体的构建；(2)转化HEK293T细胞；(3)转染IPEC‑J2细胞；(4)单克隆筛选。本发明的猪肠道上皮细胞系IPEC‑J2‑Cas9，能够稳定表达Cas9蛋白，生长曲线和未转化的IPEC‑J2细胞相同，细胞形态与IPEC‑J2细胞相同。本发明在研究仔猪肠道上皮细胞生长、分化以及应对外源物质刺激方面具有重要的应用价值。

摘要：本发明公开一种液相色谱法测定类胡萝卜素的流动相配方及其应用，属于液相色谱分离代谢小分子的方法领域。该流动相配方包括以下体积百分比的成份：A1相：90％～100％甲醇‑水；B1相：90％～100％叔丁基甲醚‑甲醇。本发明提供的一种液相色谱法测定类胡萝卜素的流动相配方，可以简单，快速(整个过程可在40min之内完成)，准确，并可以得到各组份独立，峰型好，线性关系良好，加标回收率高，相对偏差小的7～10种类胡萝卜素色谱图和测试结果。

摘要：本发明属于植物基因工程技术领域，具体公开了水稻谷氧还蛋白基因OsGrxC2在育种中的应用；所述水稻OsGrxC2基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，序列全长384bp，编码127个氨基酸；OsGrxC2基因及其编码的蛋白可用于控制植株种胚的败育程度，有剂量效应，转OsGrxC2基因纯合植株种子会发生性状分离，产生无胚或者胚退化的材料，不能留种；同时，转OsGrxC2基因纯合植株稻谷千粒重和出米率提高，提高稻米产量和品质；因此，OsGrxC2基因可用于辅助培育无胚或胚退化水稻新品系，或用于培育高千粒重和高出米率水稻新品种，具有广阔的应用前景。

摘要：本发明公开了一种快速高效筛选SgRNA靶向DNA序列的方法，该方法基于SgRNA靶向DNA序列框架，设计多条SgRNA靶向引物；然后以SgRNA载体为模板，通过PCR的方法获得hU6启动子序列+靶向SgRNA序列的DNA片段；接着将其转染到稳定表达Cas9细胞中，48小时后提取基因组；再通过PCR扩增获得含SgRNA靶点的基因组DNA片段，经双向测序分析，从而筛选SgRNA靶向DNA序列切割活性位点。本发明的筛选方法极大地缩短了筛选基因靶点时间，并降低了Crispr‑Cas9系统的操作难度，具有操作性强、重复性好、成功率高、使用简单方便、可流程化操作等优点，适合试剂盒的研发。

摘要：本发明公开一种从芽孢杆菌发酵液中快速回收芽孢杆菌细胞的方法，属于微生物后处理技术领域。本发明首先将芽孢杆菌发酵液pH值调整至合适范围，然后加入天然安全无毒絮凝剂和促凝剂溶液，充分搅拌使絮凝剂与发酵液中细胞结合并絮凝成团，静置一段时间后移去上层清液，回收下层富含细菌的絮团沉积液。通过这种絮凝沉积方法，可使芽孢杆菌发酵液浓缩至原体积1/5～1/9，细菌回收率达90％以上，最高可达97％。本发明通过往发酵液中添加絮凝剂方式使发酵液中芽孢杆菌细胞絮凝成团并快速沉降浓缩，可从发酵液中快速回收高浓度菌体，该方法可减少传统喷雾干燥工艺蒸发量，可大大减少设备投资，节省后处理时间，降低生产成本。

摘要：本发明公开一种从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法，属于生化工程后处理技术领域。本发明首先将大肠杆菌发酵液pH值调整至合适范围，然后加入天然安全无毒絮凝剂和促凝剂溶液，充分搅拌使絮凝剂与发酵液中细胞结合并絮凝成团，静置一段时间后移去上层清液，回收下层富含细菌的絮团沉积液。通过这种絮凝沉积方法，可使大肠杆菌发酵液浓缩至原体积1/5～1/10，细菌回收率达90％以上，最高可达98％。本发明通过往发酵液中添加絮凝剂方式使发酵液中大肠杆菌细胞絮凝成团并快速沉降浓缩，可从发酵液中快速回收高浓度菌体，该方法可减少传统喷雾干燥工艺蒸发量，可大大减少设备投资，节省后处理时间，降低生产成本。

摘要：本发明涉及细胞基因工程的技术领域，特别是涉及一种CD163基因编辑的猪胚胎成纤维细胞系的制备及应用，其可以减少外援遗传物质的携带，并且可以减少其他生物学功能缺失；包括以下步骤：（1）Cas9蛋白的表达；（2）Cas9蛋白的纯化；（3）sgRNA引导序列的设计；（4）体外转录；（5）猪胚胎成纤维细胞核转化；（6）细胞稀释；（7）分隔筛选；（8）扩大培养；（9）收集鉴定，本发明的细胞系可作为体细胞核移植的供体，用于转基因猪的制备。

摘要：本发明具体涉及一种条件性诱导猪滋养层细胞Aqp11基因敲除细胞系构建方法及应用。所述条件性诱导猪滋养层细胞Aqp11基因敲除细胞系及其构建方法，包括：分别以pLX‑sgRNA‑EGFP载体为模板，扩增得到hU6和Aqp11靶向sgRNA序列；以hU6和Aqp11靶向sgRNA序列为模板，SEQIDNo:3和SEQIDNo:6为引物进行重叠PCR扩增，得到hU6‑Aqp11‑sgRNA片段；XhoI和NheI两个酶双酶切pLX‑sgRNA‑EGFP载体和hU6‑Aqp11‑sgRNA片段，得到pLX‑sgRNA‑EGFP载体骨架和hU6‑Aqp11‑sgRNA粘性末端片段，连接、转化，构建得到pLX‑Aqp11‑sgRNA‑EGFP质粒；pLX‑Aqp11‑sgRNA‑EGFP质粒进行纯化、包装得到携带靶向Aqp11‑sgRNA‑EGFP的慢病毒，利用该慢病毒侵染条件性表达Cas9的猪滋养层细胞系，即构建得到所述条件性诱导猪滋养层细胞Aqp11基因敲除细胞系。