摘要：本发明公开了一种制备酰基‑酰基载体蛋白的方法。以脂肪酸盐和酰基载体蛋白为底物，使用添加MgCl₂，Li₂SO4，三磷酸腺苷，二硫苏糖醇的Tris‑HCl缓冲液，以来源于Vibrio harveyi的脂酰‑ACP合成酶催化下，制备C4‑C18链长酰基‑酰基载体蛋白，尤其突破了长链酰基‑酰基载体蛋白规模制备产率低的瓶颈，实现了高转化率的长链(C16‑C18)酰基‑酰基载体蛋白的规模化合成。本发明所合成的酰基‑酰基载体蛋白可作为多种酶的反应底物，在生物工程领域具有显著的应用前景。

摘要：本发明公开了一种阿魏酸脱羧酶高活性组合突变体及其应用，属于酶工程和基因工程技术领域。本发明构建了阿魏酸脱羧酶的突变体文库，筛选得到了对非天然底物4‑乙酰氧基肉桂酸活性显著提升的组合突变体。本发明所述阿魏酸脱羧酶组合突变体是对如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列进行突变并应用于4‑乙酰氧基苯乙烯的生物合成，包括：将第397位苯丙氨酸突变为缬氨酸，将第398位异亮氨酸突变为亮氨酸，将第438位苏氨酸突变为脯氨酸，将第441位脯氨酸突变为丝氨酸或将第441位脯氨酸突变为缬氨酸中的一种或两种以上的组合。本发明所述突变体提升了阿魏酸脱羧酶对4‑乙酰氧基肉桂酸的脱羧活性，且提高了该酶的工业应用潜力。

摘要：本发明公开了一种基于底物通道效应的双功能酶突变体及应用，属于酶工程技术领域。该突变体在序列为SEQ ID NO.1的黄素腺嘌呤二核苷酸合成酶(FADS)上定点突变204位亮氨酸所得，突变体1(L204V)、突变体2(L204H)和突变体3(L204C)的酶活力分别是野生型的2.3、1.9和1.7倍。所述的双功能酶突变体构建方法指提升反应物在双功能酶两个功能模块间传输效率，如FADS由FMNAT与RFK两个功能模块组成，本发明通过上述构建方法最终筛选到三个提升反应物在两个模块间传输效率的双功能酶突变体，进而提升酶的活性。本发明公开的FADS高活性突变体提高了该酶的工业应用潜力。

摘要：本发明公开一种基于连续位点组合突变的耐热脂肪酸光脱羧酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明针对小球藻来源脂肪酸光脱羧酶CvFAP构建了连续位点组合突变体文库，筛选到一个8位点组合突变体M8，组合突变体M8的最适反应温度为45℃，相比CvFAP提升15℃，且M8在55℃条件下保留50％活性，而CvFAP在该温度几乎无活性。本发明突破了常规CvFAP催化最适温度30℃，且底物脂肪酸依赖二甲基亚砜等有机溶剂助溶的限制。在高于豆蔻酸熔点的55℃且无有机溶剂助溶条件下，实现了以含有突变体M8的全细胞高效催化豆蔻酸生成十三烷。本发明为高温且不需有机助溶剂条件下脂肪酸光脱羧酶的应用提供前景。

摘要：本发明公开一种酶法制备β‑烟酰胺单核苷酸的方法，属于生物技术领域。本发明以D‑核糖、烟酰胺、腺嘌呤核苷三磷酸ATP为原料，以核糖激酶、磷酸核糖焦磷酸激酶以及烟酰胺磷酸核糖转移酶催化合成NMN，同时反应体系引入了多聚磷酸激酶和多聚磷酸盐形成了ATP的再生循环，引入了焦磷酸水解酶水解PPi，保证了ATP循环利用的同时，消除了副产物ADP和PPi对产率产生的不利影响；并利用AMP核苷酶构建了AMP回收系统，将副产物AMP转化成5磷酸核糖，进而转化为PRPP，实现了在不额外投料的条件下增加PRPP的合成途径，进一步增加NMN合成效率。该发明最终获得NMN的产率达90％以上，实现了低酶量条件下高效合成NMN。

摘要：本发明公开了一种体外生物酶法合成L‑苹果酸的方法，属于有机酸制备技术领域。本发明首先分别获得乙醇脱氢酶、丙酮酸脱羧酶和苹果酸酶，然后利用偶联底物再生NADH的策略，将乙醇脱氢酶、丙酮酸脱羧酶和苹果酸酶进行级联反应，构建从乙醇固定两分子CO2合成L‑苹果酸的合成路线，进而获得L‑苹果酸。该方法的为工业合成L‑苹果酸提供了一种新策略，具有较为广阔的应用前景。

摘要：本发明公开了一种阿魏酸脱羧酶高活性突变体及其应用，属于酶工程和基因工程技术领域。本发明所述阿魏酸脱羧酶突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.14或SEQ ID NO.16。本发明解决了天然阿魏酸脱羧酶Fdc1催化活性低的技术问题，可用于4‑乙酰氧基苯乙烯的生物合成。本发明所述突变体提升了阿魏酸脱羧酶对4‑乙酰氧基肉桂酸的脱羧活性，且提高了该酶的工业应用潜力。

摘要：本发明公开一种合成海藻糖‑6‑磷酸的多酶级联催化反应体系及其应用，属于生物催化技术领域。本发明通过体外重组表达麦芽糖磷酸化酶、多聚磷酸葡萄糖激酶、海藻糖‑6‑磷酸磷酸化酶和多聚磷酸激酶，构建了含有上述酶的多酶级联催化反应体系，并实现了多酶级联催化反应体系催化原料麦芽糖合成海藻糖‑6‑磷酸，本发明方法的原料利用率高，麦芽糖到目标产物海藻糖‑6‑磷酸的转化效率达到90％，为当前国内外报道的最高水平，为海藻糖‑6‑磷酸工业合成奠定基础。

摘要：本发明公开一种基于祖先序列重建的呋喃二甲酸脱羧酶及其应用，属于酶工程和基因工程技术领域。本发明的呋喃二甲酸脱羧酶命名为HmfF‑N10，由数据库中提取的Prenylated flavin mononucleotide(prFMN)依赖型呋喃二甲酸脱羧酶HmfF的多个同源酶序列经祖先序列重建获得，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，实验表明HmfF‑N10具有优异的热稳定性，其熔温温度为86.83℃，且HmfF‑N10在80℃仍保留60％的催化活性。此外，本发明的HmfF‑N10具有催化对苯二甲酸脱羧生成苯甲酸的活性，可用于对苯二甲酸类塑料废弃物的生物降解。

摘要：本发明公开一种重组阿魏酸酯酶及其突变体和应用，属于酶工程技术领域。本发明的阿魏酸酯酶CbFAE来源于Clostridium butyricum，野生型酶氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其编码基因序列如SEQ ID NO:2所示，通过构建含CbFAE基因的重组表达载体，在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达并纯化获得目标酶。底物谱分析表明，该酶不仅具备催化阿魏酸甲酯等模式底物分解活性，还具备分解对苯二甲酸单(2‑羟乙基)酯（MHET）为对苯二甲酸（TPA）和乙二醇（EG）的催化活性；本发明还基于序列及结构分析构建了CbFAE突变体L168R，突变体酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，在相同反应条件下催化MHET分解活性较野生型提高近4倍。本发明提供的重组阿魏酸酯酶及其突变体，拓展了MHET水解酶的种类，为MHET的生物降解提供了新途径。