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1:
[发明]
一种糖基转移酶突变体及编码基因和催化Reb D的用途
申请号:
202510044771.9
公开号:CN119464245A 主分类号:C12N9/10
申请人:
浙江正硕生物科技有限公司
申请日:2025.01.13 公开日:2025.02.18
发明人:
吴黎诚
摘要:本发明提供了一种糖基转移酶突变体及编码基因和催化Reb D的用途,属于生物酶技术领域。本发明提供了一种能够高效催化Reb A生物合成Reb D的糖基转移酶突变体,所述糖基转移酶突变体是在PmUGT1的氨基酸序列的第147位(谷氨酰胺Q)、第206位(谷氨酸E)、第209位(苯丙氨酸F)和第268位(苷氨酸G)进行单点及多点突变,与野生型PmUGT1相比,催化活性最高可提高9.27倍。
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2:
[发明]
一种包含RKRED核苷酸序列的重组表达载体、重组工程菌及构建方法和酶及其应用
申请号:
202111079176.7
公开号:CN115820700A 主分类号:C12N15/70
申请人:
浙江正硕生物科技有限公司
申请日:2021.09.15 公开日:2023.03.21
发明人:
吴黎诚
;
郭小雷
摘要:本发明提供了一种包含RKRED核苷酸序列的重组表达载体、重组工程菌及构建方法和酶及其应用,涉及基因重组技术领域。本发明采用基因工程的方法,利用重组表达载体或重组工程菌表达酮还原酶RKRED,所述酮还原酶RKRED为双功能酶,相比于现有的双酶催化体系,催化方法简单,酶液投量少,最终得到的(R)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸乙酯或(R)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸甲酯,手性值99.9%以上,产品纯化收率90%以上,含量110%~112%含量110%~112%(相对国药沃凯‑98%的标准品而言),产品透明无色。
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3:
[发明]
一种智能化灾备数据存储装置及使用方法
申请号:
202510813710.4
公开号:CN120704951A 主分类号:G06F11/14
申请人:
深圳飞创云信息技术有限公司
申请日:2025.06.18 公开日:2025.09.26
发明人:
宋志诚
;
吴黎明
摘要:本发明涉及数据存储技术领域,且公开了一种智能化灾备数据存储装置及使用方法,包括存储机箱,设置于存储机箱上的控制面板,以及设置于存储机箱内部的存储硬盘,还包括设置于控制面板上的数据传输部;所述数据传输部的前侧开设有用于数据线接头插入的接口,所述数据传输部的内部开设有内空腔。本智能化灾备数据存储装置,通过喷气嘴将气流朝数据线接头处喷出,利用喷出的气流对数据线接头上附着的微小灰尘和杂质进行全面、有效的吹气清理,并且在数据线接头插入过程中多次进行吹气清理,确保数据线接头表面清洁,避免了灰尘堆积阻碍数据线接头与传输端子之间的良好接触,有效防止了接触不良情况的发生,大大提高了数据传输的稳定性和可靠性。
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4:
[发明]
富马酸喹硫平缓释制剂及其制备方法
申请号:
201410232678.2
公开号:CN104013970A 主分类号:
申请人:
中山大学
申请日:2014.05.28 公开日:2014.09.03
发明人:
吴传斌
;
陆明
;
黎永诚
摘要:本发明公开了一种富马酸喹硫平缓释制剂及其制备方法,所述缓释制剂由下述重量百分比的原料制备而成:富马酸喹硫平20-40wt%,乙基纤维素20-50wt%,所述乙基纤维素的粘度为4-45cps,亲水性辅料20-40wt%,所述亲水性辅料为共聚维酮、聚维酮、黄原胶、羧甲基淀粉钠或羟丙基纤维素中的至少一种;所述制备方法为热熔挤出法。本发明制备出在水中可达24h缓释效果的富马酸喹硫平缓释制剂,并同时确定了该种缓释制剂的最佳原料及其用量;所述制备方法工艺简单,能耗小,无溶剂残留,整个过程不会引入其他杂质,易于实现连续化大生产,且采用该方法制得的缓释制剂中,药物分散更均匀。
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5:
[发明]
一种提高L-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法
申请号:
201810905472.X
公开号:CN109022380A 主分类号:C12N9/06(2006.01)I
申请人:
浙江正硕生物科技有限公司
申请日:2018.08.10 公开日:2018.12.18
发明人:
吴黎诚
;
郭小雷
;
章权
摘要:本发明属于基因工程领域,涉及一种提高L‑氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法,采用L‑氨基酸脱氨酶(L‑amino acid deaminase,LAAD)基因与过氧化氢酶(Catalase)基因串联表达。本发明采用L‑氨基酸脱氨酶串联过氧化氢酶进行表达,提高了单位菌体的酶活,也提高了单位发酵体积菌体的量,从而具有很高的工业化运用价值。
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6:
[发明]
一种固定L-氨基酸脱氨酶的方法
申请号:
201810905503.1
公开号:CN109022412A 主分类号:C12N11/12(2006.01)I
申请人:
浙江正硕生物科技有限公司
申请日:2018.08.10 公开日:2018.12.18
发明人:
吴黎诚
;
郭小雷
;
章权
摘要:本发明属于生物技术领域,涉及一种固定L‑氨基酸脱氨酶的方法,将纤维素结合域(cellulose binding domain,CBD)基因片段通过一段DNA短链连接至L‑氨基酸脱氨酶(L‑amino acid deaminase,LAAD)基因片段的3’或5’端。本发明将L‑氨基酸脱氨酶融合纤维素结合域,与微晶纤维素结合而固定,由于微晶纤维素廉价易得,固定化成本低,而且固定过程的特异性起到了对酶纯化的作用,使得酶催化的副产物极少。固定化L‑AAD‑CBD由于成本低,可多次使用,具有较大的工业化运用价值。
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7:
[发明]
一种高通量筛选L-氨基酸脱氨酶突变重组菌株的方法
申请号:
201810905470.0
公开号:CN109097383A 主分类号:C12N15/70(2006.01)I
申请人:
浙江正硕生物科技有限公司
申请日:2018.08.10 公开日:2018.12.28
发明人:
吴黎诚
;
郭小雷
;
章权
摘要:本发明属于酶的基因工程技术领域,具体涉及一种高通量筛选L‑氨基酸脱氨酶突变重组菌株的方法,包括如下步骤:1.重组菌构建:全基因合成来源于奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)L‑氨基酸脱氨酶(L‑amino acid deaminase,LAAD)基因(genbank登录号EU669819.1),构建质粒LAAD,转化构建重组菌PMLAAD;2.易错PCR;3.突变文库的建立;4.发酵;5.酶催化反应及显色;6.酶标仪检测;7.筛选突变子发酵和筛选;8.突变株发酵和筛选。通过高通量筛选系统结合易错PCR,大大节约了时间和成本,并提高了筛选效率,提高了获得正突变菌株的几率。
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8:
[发明]
D-氨基酸和阿尔法酮酸的制备方法
申请号:
201810905471.5
公开号:CN109097409A 主分类号:C12P13/08(2006.01)I
申请人:
浙江正硕生物科技有限公司
申请日:2018.08.10 公开日:2018.12.28
发明人:
吴黎诚
;
郭小雷
;
章权
摘要:本发明属于生物技术领域,涉及D‑氨基酸和阿尔法酮酸的制备方法,包括如下步骤:1.重组菌构建:全基因合成L‑氨基酸脱氨酶基因LAAD,连入表达载体,转化至表达菌株,构建重组菌PMLAAD;全基因合成氨基酸消旋酶基因AAR,连入表达载体,转化至表达菌株,构建重组菌AAR;2.发酵;3.酶催化;4.分离纯化。本发明的酶催化生产α‑酮酸钙和D‑氨基酸,两个产物都具有经济价值,产品质量高,从而大大降低了生产成本。
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9:
[发明]
一种耐热性提高的L-氨基酸脱氨酶突变体及其制备方法
申请号:
201810905502.7
公开号:CN109136205A 主分类号:C12N9/06(2006.01)I
申请人:
浙江正硕生物科技有限公司
申请日:2018.08.10 公开日:2019.01.04
发明人:
吴黎诚
;
郭小雷
;
章权
摘要:本发明属于生物技术领域,涉及一种提高L‑氨基酸脱氨酶热稳定性的方法,是对奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)L‑氨基酸脱氨酶进行定点突变获得的酶突变体,其中突变位点为120位的Trp。本发明基于蛋白空间结构信息,对结构内部特殊氨基酸位点周围的空间环境及氨基酸之间包括氢键,离子键,范德瓦尔里等的相互作用进行分析,结合分子生物学技术对特定的氨基酸位点进行改造,通过理性设计突变位点,运用定点突变的方法获得L‑氨基酸脱氨酶突变体,可提高获得正向突变的酶突变体的概率,同时也大大减少了突变体筛选的工作量。本发明提高了酶的结构稳定性,进而有利于延长酶的使用寿命。
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10:
[发明]
一种D-氨基酸的制备方法
申请号:
201810905507.X
公开号:CN109136298A 主分类号:C12P13/04(2006.01)I
申请人:
浙江正硕生物科技有限公司
申请日:2018.08.10 公开日:2019.01.04
发明人:
吴黎诚
;
郭小雷
;
章权
摘要:本发明涉及一种D‑氨基酸的制备方法,包括如下步骤:1、重组菌构建:克隆N‑乙酰‑D‑氨基酰化酶基因,基因连入pET系列载体或pKK223‑3载体,转化至BL21(DE3)宿主菌,构建D酰化酶重组菌(NLase);克隆N‑乙酰‑氨基酸消旋酶基因,基因连入pET系列载体或pKK223‑3载体,转化至BL21(DE3)宿主菌,构建N‑乙酰氨基酸消旋酶重组菌(NAAR);2、重组菌发酵;3、固定化酶制备;4、固定化酶转化联合膜分离;5、产品结晶。本发明降低了酶的成本,减少了副产物乙酸对消旋酶的抑制。同时由于转化液杂质很少,分离纯化简单,收率高,产品品质好,得到的D‑氨基酸e.e.值达99.9%以上,含量99%以上,摩尔收率85%以上。
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