摘要：本发明提供一种重组大肠杆菌高密度发酵的方法。本发明的方法包括：采用三级菌种保藏方法，将构建后的重组大肠杆菌进行保藏，并经过活化、摇瓶培养、种子罐培养后转入发酵罐进行通气搅拌发酵罐培养，在发酵罐培养过程中通过提高搅拌转速及空气流量来保证溶氧水平，并根据pH的变化调整补料速度，当菌体生长至一定阶段后加入诱导剂，并降温发酵至结束。本发明降低了发酵过程中由于菌种退化导致生产异常现象的出现，优化了发酵、补料培养基及补料方法，保证了菌体快速生长代谢所需营养条件及外部环境，大大提高了放罐时菌体含量及产物产量，并且批次间可重复性好，有利于工业化生产控制。

摘要：本发明公开了一种重组大肠杆菌的破碎方法，其特征在于：发酵获得的重组大肠杆菌菌液，经陶瓷膜或离心机浓缩后，按照比例加入溶菌酶及Mg²⁺，并在低温条件下保持搅拌0.5~1h，然后经过均质机进行高压匀浆破碎1~3次，用显微镜镜检菌体至达标。本发明是一种快速高效、运行方便且能用于大规模工业生产的细胞破碎方法。

摘要：本发明公开了一种用大肠杆菌重组酶液的大规模保存方法，其特征在于：经重组大肠杆菌发酵、提取后获得的重组酶液，加入pH为6.5~8.0的Tris·HCl、甘油、Mg²⁺和苯甲酸钠，控制酶液pH在6.5~8.0范围内，分装后-20℃~20℃保存。本发明有效防止了酶液在贮存过程中蛋白的析出及酶的变性，保证了酶的蛋白结构及活力的稳定。同时也防止了酶液在贮存过程中滋生杂菌。

摘要：本发明公开了一种两步催化制备(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的方法，其特征在于：其以4-氯乙酰乙酸乙酯（COBE）为底物，在同一个反应体系，利用生物催化剂，通过两步催化反应，在水相缓冲液中反应制备(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯，过程中不需对中间产物(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯提取纯化。本发明反应步骤简单、成本较低、减少了有机溶剂和剧毒品的使用量，是一种绿色生产方法。

摘要：本发明公开了一种双酶法制备瑞舒伐他汀侧链中间体的方法，其特征在于：在反应容器中加入配制好的水相缓冲液，然后依次加入一部分底物6-氯-3,5-二羰基己酸叔丁酯、异丙醇、生物催化剂，于温度25℃～40℃下搅拌反应，利用气相色谱方法（GC）检测反应进程，至转化率达到80％～100％，分批加入另一部分底物6-氯-3,5-二羰基己酸叔丁酯，继续进行反应，至反应转化率达到95%～100％时结束反应，加入乙酸乙酯多次萃取，合并有机相并蒸发脱去溶剂，即得(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯。本发明两步反应可用一锅法完成，如此进行生产，反应步骤简单，可以节省生产原料和和动力能源的消耗，有效地节省了成本，在工业化应用具有十分重要的意义。

摘要：本发明公开了一种连续制备他汀药物中间体(R)-3-羟基戊二酸乙酯的方法，包括以下工艺步骤：第一步(S)-4-氯-3羟基丁酸乙酯（(S)-CHBE）在含有重组卤醇脱卤酶（HHDH）的催化下生成(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯，第二步(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯在重组腈水解酶（NIT）的催化下生成(R)-3-羟基戊二酸乙酯，所述的两个反应步骤均在反应罐中的水溶液中催化反应；本发明通过两步耦联生物催化反应，采用特定的卤醇脱卤酶和腈水解酶，连续催化制备他汀类药物的关键中间体，两步串联的连续绿色催化反应，无需提出中间体即可进行下一步反应，可连续操作、设备利用率高、成本低、简便易操作。

摘要：本发明公开了一种全细胞催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的方法，其中以4-氯乙酰乙酸乙酯（COBE）为底物，利用生物催化剂在以异丙醇为氢供体的条件下，然后加入CaCl₂、重组酮还原酶的大肠杆菌全细胞，于温度25℃～40℃下搅拌，在pH为6.0～8.0的水相中不对称还原反应生成(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯；利用细胞本身的辅酶再生体系，无需添加外源性的辅酶，解决了传统生物法中催化效率低以及成本高的问题，该方法反应条件温和、反应效率高、操作简便，特别是催化反应过程不用加还原性辅酶因子，大大提高了效率和降低了反应的成本，具有广阔的工业生产应用前景。

摘要：本发明涉及一种酶的筛选方法，特别涉及一种卤醇脱卤酶的筛选方法。用pH显色经过初筛和复筛两步法来筛选高酶活的卤醇脱卤酶。本发明使用深孔板进行微型化培养，实现了高通量培养和粗酶液的高通量制备；突破性的利用pH的变化来筛选高酶活的卤醇脱卤酶，效率高，成本低、速度快；消耗的培养基和试剂少；本发明使得可机械化自动化操作以实现，借助自动化的高通量筛选仪器可以进一步大幅度降低劳动量，提高筛选通量。

摘要：本发明公开了一种利用全细胞催化制备他汀侧链中间体的方法，其特征在于：在反应容器中加入配制好的所述水相缓冲液，然后依次加入底物(5S/R)-6-X-3-羟基-5-羰基己酸叔丁酯1(X=Cl,CN或OR)、异丙醇、重组酮还原酶的大肠杆菌全细胞，于温度25℃～40℃下搅拌反应，利用气相色谱方法（GC）检测反应进程，至反应转化率达到95%～100％时结束反应，加入乙酸乙酯多次萃取，合并有机相并蒸发脱去溶剂，即得(3R,5S/R)-6-X-3,5-二羟基己酸叔丁酯2(X=Cl,CN或OR)。本发明反应步骤简单、成本较低、产品纯度高，可大规模生产(3R,5S/R)-6-X-3,5-二羟基己酸叔丁酯2(X=Cl,CN或OR)的绿色生物制备方法。

摘要：本申请提供一种中间业务系统的业务处理方法和装置。所述方法包括：接收来自上层业务系统的第一业务报文，对第一业务报文的头部进行解析获得其中所携带的业务类型标识；基于业务类型标识查找预设模板列表获得对应的第一流程模板，模板列表包括了流程模板与业务类型标识的对应关系，第一流程模板包括一个或多个处理动作；在基于第一流程模板对第一业务报文的处理过程中确定对应的下层业务系统；使用第二流程模板基于第一业务报文构造第二业务报文，并将该第二业务报文发送给下层业务系统。在本申请中间业务系统的处理过程中只需要根据约定的业务类型标识调用预先定义好的流程处理模板进行即可，可扩展性好，稳定性高。