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1:
[发明]
提高人胱抑素C蛋白在大肠杆菌中可溶性表达量的方法
申请号:
201510398984.8
公开号:CN105087622A 主分类号:
申请人:
北京嘉万生物技术有限公司
申请日:2015.07.08 公开日:2015.11.25
发明人:
李小红
;
孔毅荣
;
刘强
;
于海双
摘要:本发明公开了一种提高人胱抑素C蛋白在大肠杆菌中可溶性表达量的发酵方法,该编码基因的核苷酸序列SEQ ID NO:1,重组人胱抑素C的表达方法,包括以下步骤:直接合成并优化密码子,将重组人胱抑素C插入到原核表达载体的多克隆位点,构建重组表达质粒,将重组表达质粒转化到表达宿主菌大肠杆菌,筛选阳性克隆,得工程菌,工程菌经发酵、诱导、分离、纯化,得重组人胱抑素C。通过优化发酵罐的溶氧,pH,搅拌速率,补料条件,使蛋白的产量可以达到0.4g/L,且活性和天然胱抑素C蛋白相近。本发明提供的重组胱抑素C发酵放大生产方法,操作简单,且表达的胱抑素C产量高达0.4g/L,纯度达到95%以上,同时利用重组人胱抑素C蛋白制备多抗血清和标准品,目前未见表达效率更好的报道。
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2:
[发明]
一种重组酵母胱硫醚beta合酶催化中心的表达及放大生产
申请号:
201510398985.2
公开号:CN105039368A 主分类号:
申请人:
北京嘉万生物技术有限公司
申请日:2015.07.08 公开日:2015.11.11
发明人:
李小红
;
孔毅荣
摘要:一种重组酵母胱硫醚bata合酶催化中心的表达及生产放大,该编码基因的核苷酸序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2,重组酵母胱硫醚beta合酶催化中心353个AA催化中心,将重组催化中心插入到原核表达载体的多克隆位点,构建重组表达质粒,转化到表达宿主大肠杆菌,筛选阳性克隆,获得工程菌,工程菌经发酵、诱导、分离、纯化,得重组胱硫醚beta合酶。通过优化发酵罐的溶氧、PH、搅拌速率以及补料条件,使酶的产量可以达到5g/L且酶活可以达到600-700U/mg。本发明提供的重组胱硫醚beta合酶催化中心的表达方法以及放大生产策略,其操作简单,而且表达的胱硫醚beta合酶产量高达5g/L,纯度达到95%以上,目前未见表达效率更好的报道。
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3:
[发明]
PGⅡ与MBP融合蛋白的可溶性分泌表达及其应用
申请号:
201510399896.X
公开号:CN104962573A 主分类号:
申请人:
北京嘉万生物技术有限公司
申请日:2015.07.08 公开日:2015.10.07
发明人:
孔毅荣
;
于海双
;
李小红
摘要:本发明属于生物工程技术领域,特别涉及一种人胃蛋白酶原II(PG II)与麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性分泌表达;提供了该融合蛋白的制备方法。本发明还公开了上述重组BMP-PG II融合蛋白在制备单克隆抗体,胃蛋白酶原II试剂盒校准品中的应用。本发明利用了Ptac启动子、malE信号肽、麦芽糖结合蛋白等元件实现了PG II在大肠杆菌周至内的可溶性分泌表达,不仅大大提高了来自原核表达系统的重组人PG II蛋白的免疫原活性,并且有效的降低了重组PG II的制备成本。
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4:
[发明]
一种人NGAL蛋白重组表达及制备方法
申请号:
201510399897.4
公开号:CN104988171A 主分类号:
申请人:
北京嘉万生物技术有限公司
申请日:2015.07.08 公开日:2015.10.21
发明人:
孔毅荣
;
李小红
;
刘强
;
于海双
摘要:本发明公开了一种具有天然免疫原活性的人源中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)的重组表达及制备方法,属于生物工程技术领域的发明。本发明利用大肠杆菌表达系统能够稳定、大量表达重组NGAL融合蛋白,然后利用蛋白酶切割NGAL融合蛋白后获得具有天然免疫原活性的NGAL重组蛋白。制备的NGAL重组蛋白可用作免疫原制备单克隆抗体和多抗血清,也可用于检测急性肾损伤的NGAL检测试剂。
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5:
[发明]
PGI与MBP融合蛋白的可溶性分泌表达及其应用
申请号:
201510409409.3
公开号:CN105002203A 主分类号:
申请人:
北京嘉万生物技术有限公司
申请日:2015.07.14 公开日:2015.10.28
发明人:
孔毅荣
;
于海双
;
李小红
摘要:本发明属于生物工程技术领域,特别涉及一种人胃蛋白酶原I(PGI)与麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性分泌表达;提供了该融合蛋白的制备方法。本发明还公开了上述重组BMP-PG I融合蛋白在制备单克隆抗体,胃蛋白酶原I试剂盒校准品中的应用。本发明利用了Ptac启动子、malE信号肽、麦芽糖结合蛋白等元件实现了PGI在大肠杆菌周至内的可溶性分泌表达,不仅大大提高了来自原核表达系统的重组人PGI蛋白的免疫原活性,并且有效的降低了重组PGI的制备成本。
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6:
[发明]
一种提高重组N-乙酰神经氨酸醛缩酶产量的方法
申请号:
201510409410.6
公开号:CN105087534A 主分类号:
申请人:
北京嘉万生物技术有限公司
申请日:2015.07.14 公开日:2015.11.25
发明人:
李小红
;
孔毅荣
摘要:本发明公开了一种提高重组N-乙酰神经氨酸醛缩酶产量的方法。本发明所提供的N-乙酰神经氨酸醛缩酶基因为SEQ ID NO.1,本发明将大肠杆菌N-乙酰神经氨酸醛缩酶基因Neu5Ac克隆到原核表达载体pET28a上,获得高效表达N-乙酰神经氨酸醛缩酶的重组菌。通过优化发酵罐的溶氧、PH、搅拌速率以及补料条件,使酶的产量可以达到4.5g/L,酶活可以达到600-800U/mg。本发明提供的提高N-乙酰神经氨酸醛缩酶产量的方法,其操作简单,产量较高,纯度达到98%以上,具有较高的应用前景及开发价值。
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7:
[发明]
cTnⅠ主要表位区的重组表达及其抗体的制备方法
申请号:
201610002297.4
公开号:CN105567719A 主分类号:
申请人:
北京嘉万生物技术有限公司
申请日:2016.01.06 公开日:2016.05.11
发明人:
孔毅荣
;
李小红
;
于海双
摘要:本发明选取cTnⅠ的三个主要的抗原表位区,分别构建其表达载体,在大肠杆菌表达系统中大量制备人cTnⅠ的三种重组蛋白:cTnⅠ-N、cTnⅠ-S和cTnⅠ-C。三种重组蛋白具有天然cTnⅠ蛋白的免疫原性,可作为抗原免疫动物,制备针对cTnⅠ不同表位区的单抗或多抗,也可偶联载体蛋白后免疫动物,制备cTnⅠ特定区域的单抗或者多抗。
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